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品牌:原鑫生物
貨號:YX-SS-SJ2214
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小鼠神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白4(NRG-4)試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠NRG-4抗體包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品中的小鼠NRG-4會與包被抗體結合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠NRG-4抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗小鼠NRG-4抗體與結合在包被抗體上的小鼠NRG-4結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,NRG-4濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣品中NRG-4的濃度。


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由于高脂肪和高糖飲食伴隨著久坐不動的生活方式,糖尿病已成為全球流行病。文獻發(fā)現(xiàn)表明 Nrg4 對治療肥胖相關的代謝紊亂包括 2 型糖尿病 (T2D) 具有潛在的治療作用。在我們的研究中使用了脂肪組織來源的 MSCs (ADSCs),因為它們很豐富,并且可以通過微創(chuàng)手術收獲。最后,我們的研究表明,ADSC 移植通過多種機制改善 HFD 喂養(yǎng)小鼠的葡萄糖耐量和代謝平衡,包括上調(diào) GLUT4 表達和抑制炎癥。更重要的是,我們的研究表明,鑒于 Nrg4 在減弱肝臟脂肪生成中的作用,Nrg4 過表達可以提高 ADSCs 在改善胰島素抵抗 (IR) 和其他肥胖相關代謝紊亂方面的功效。


本研究的目的是評估間充質(zhì)干細胞 (MSC) 中過度表達神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白 4 (Nrg4)(一種已知可減弱肝臟脂肪生成的生長因子)是否可以增強其改善胰島素抵抗 (IR) 和改善高血脂代謝的能力。脂肪飲食(HFD)喂養(yǎng)的小鼠。六周大的 C57BL/6 小鼠喂食 HFD 12 周,然后靜脈移植脂肪組織來源的 MSCs (ADSCs) 或過表達 Nrg4 的 ADSCs (Nrg4-ADSCs)。在細胞注射后四和八周進行體重和血糖和胰島素水平的評估以及葡萄糖耐量試驗和胰島素耐量試驗。還測量了血漿和肝臟中的甘油三酯 (TG) 和總膽固醇 (TC) 水平。葡萄糖轉運蛋白 4 (GLUT4)、白介素-6 (IL-6)、通過實時聚合酶鏈反應 (RT-PCR) 分析評估肌肉和脂肪組織中的腫瘤壞死因子-α (TNF-α) 和腫瘤壞死因子-α (TNF-α)。


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分別通過 RT-PCR 和蛋白質(zhì)印跡在 mRNA 和蛋白質(zhì)水平評估與脂質(zhì)代謝相關的基因的表達,包括甾醇調(diào)節(jié)元件結合蛋白-1c (SREBP-1c) 和脂肪酸合酶。接受 ADSC 或 Nrg4-ADSC 的 HFD 喂養(yǎng)小鼠顯示出血糖水平降低和胰島素敏感性增強,而 Nrg4-ADSC 組在這些方面表現(xiàn)出更大的改善。ADSC 或 Nrg4-ADSC 輸注可部分逆轉 HFD 誘導的骨骼肌和脂肪組織中 GLUT4、IL-6 和 TNF-α 表達的變化;然而,這兩組之間沒有觀察到差異。與 ADSC 組相比,Nrg4-ADSC 處理的小鼠顯示出較少的脂肪細胞沉積,血清和肝臟中的 TG 和 TC 水平降低,SREBP-1c 和脂肪酸合酶的表達降低。


ADSC 移植可降低血糖水平并改善 HFD 誘導的 IR。ADSC 的保護作用可歸因于骨骼肌和脂肪組織中炎癥的抑制和葡萄糖攝取的增加。更重要的是,ADSCs 中的 Nrg4 過表達可以通過減弱肝臟脂肪生成來增強這種功效。ADSC 的保護作用可歸因于骨骼肌和脂肪組織中炎癥的抑制和葡萄糖攝取的增加。更重要的是,ADSCs 中的 Nrg4 過表達可以通過減弱肝臟脂肪生成來增強這種功效。ADSC 的保護作用可歸因于骨骼肌和脂肪組織中炎癥的抑制和葡萄糖攝取的增加。更重要的是,ADSCs 中的 Nrg4 過表達可以通過減弱肝臟脂肪生成來增強這種功效。


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