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| 人抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)ELISA Kit試劑盒/測試盒 |
 品牌：原鑫生物
貨號：YX-130913
規格：48T/96T
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人抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)ELISA Kit試劑盒/測試盒 
人抗中性粒細胞胞漿抗體(cANCA)ELISA Kit 詳細信息 貨號：YX-130913 品牌： 原鑫生物 供應商：上海原鑫生物科技有限公司 檢測限： / 檢測方法： 酶聯免疫法雙抗夾心法 應用： ELISA 適應物種： 人/動物/植物 樣本： 血清、血漿、尿液、細胞培養上清、組織液等 規格： 96T/48T
【實驗原理】
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗該指標抗體、HRP標記的親和素，經過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。 試劑盒組成及試劑配制 1、酶聯板：一塊（96孔；48孔） 2、標準品：2瓶 3、樣品稀釋液：1×20ml/瓶 4、生物素標記抗體稀釋液：1×10ml/瓶 5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液：1×10ml/瓶 6、生物素標記抗體：1×120μl/瓶（1：100） 7、辣根過氧化物酶標記親和素：1×120μl/瓶（1：100） 8、底物溶液：1×10ml/瓶 9、濃洗滌液：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 10、終止液：1×10ml/瓶
【實驗材料與試劑配制】
1、儀器與材料：酶標儀（使用前預熱30分鐘），微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水，濾紙。 2、洗液的配制：按比例配制洗液備用。
【樣品收集、處理及保存】
1、細胞培養上清： 適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。 2、細胞： 用PBS反復洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104-106/ml 左右，通過反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。 3、血清： 在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。 4、血漿： 應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上清。 5、體液： 包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。 6、組織標本： 切取組織標本，稱取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000rmp離心20分鐘，收集上清進行檢測。 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 7、保存： 如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70℃保存，避免反復冷凍。保存過程中如出現沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
【操作步驟】
1、取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置30分鐘。 2、分組：取出96孔板，根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，把剩余的板條繼續冷藏處理。10個標準孔，1個空白對照 3、標準品的稀釋：準備小試管6只，依次編好號碼，先在各小試管中加入標準品稀釋液100ul，然后取原濃度標準品100ul 加入一只已編好號的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第三只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中，充分混勻；再在該試管中取100ul 加入第五只試管中，充分混勻；然后在該試管中取100ul，棄掉。第六只試管作為0 號標準品。 4、加樣：依照標準品的順序分別加入50ul的標準品溶液于空白微孔中；空白對照孔加入50ul的蒸餾水；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。 5、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 6、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒棄去，如此重復5次，拍干。 7、加酶標溶液：標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標溶液（空白對照孔除外）。 8、溫育：酶標板用封板紙密封后，放入濕盒內于37℃恒溫孵育1小時。 9、洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔，靜置15-30s，充分清洗酶標板5次，用吸水紙徹底拍干。 10、顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后，再加入顯色劑B液50ul。 11、終止：25-37℃下避光反應10-15分鐘，加入50ul終止液。 12、讀板：在450nm波長讀取各孔的OD值。 注：讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡，讀板時間控制在終止反應后的30分鐘內，以免影響準確性。
【數據計算】
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，即為樣品的實際濃度。 六．注意事項： 1）實驗操作中必須使用一次性吸頭，避免交叉污染。 2）加樣：加樣時，要控制加樣速度，避免第一孔與*一孔間的時間間隔過大，否則將會導致不同的預孵育時間，從而影響實驗的準確性以及重復性。 3）孵育：嚴格按照說明書上規定的孵育時間和溫度進行。 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化，如果顏色較深，請提前加入終止液終止反應。 4）建議實驗前預測樣品含量，如樣品濃度過高，應對樣品進行稀釋，計算結果時乘以相應的稀釋倍數。 5）建議使用本試劑盒時先做預實驗（即先做標準曲線，試用幾個標本），如果對本試劑盒有任何疑問，可和所購經銷商聯系，如果因運輸過程導致試劑盒失效，可要求調換，但概不承擔產品本身以外的任何損失。
研發、生產科研產品：
ELISA試劑盒：多種屬、1000多種指標：人、大小鼠、通用、牛、兔、山羊、倉鼠、豬、馬、雞、犬、豚鼠、猴、綿羊
抗體：兔多抗、鼠單抗種類豐富，一抗1萬余種，二抗100多種；
重組蛋白：多項發明專利，原核表達系統穩定表達蛋白1000余種。 在線聯系：（周經理） 17621047120 QQ：2441609688（任經理）
官方電話： 400-788-2680 更多elisa試劑盒：http://www.cjs100.cn/product-32-104-1.html
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400-788-2680
