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什么是氮代謝類生理生化檢測服務?

什么是氮代謝類生理生化檢測服務


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一、氮代謝是什么?

氮代謝是氨的同化及蛋白質等有機氮化合物的合成、分解的轉化過程。同時它也是植物的基本生理過程之一,參與地球化學循環的重要組成部分,植物氮素同化的主要途徑是經過硝酸還原為銨后直接參與氨基酸的合成與轉化,期間硝基還原酶(NR)、谷氨酰胺合成酶(GS)、谷氨酰胺合酶(GOGAT)、天冬酰胺轉氨酶(AspAT)等關鍵酶參與了催化和調節,以氨基酸為主要底物在細胞中合成蛋白質,再經過對蛋白質的修飾、分類、轉運及儲存等,成為植物有機體的組成部分,同時與植物的碳代謝等協調統一,共同成為植物生命活動的基本過程。

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氮代謝=攝入氮-排出氮(糞氮+尿氮+經皮膚排出的氮)

二、怎么檢測氮代謝?

氮代謝是指氮素及含氮物質的同化、異化和排泄,總稱為氮素代謝我們采用Agilent 1260 Infinity型高效液相色譜儀對樣品進行分離,結合DAD檢測器對樣品進行鑒定或采用Thermo Scientific的U3000快速液相色譜對樣品進行分離,結合Thermo Scientific? Q Exactive?對樣品進行鑒定,可高效、精準的檢測氮代謝物的含量變化。目前可檢測的氮代謝物包括尿素、肌氨酸酐、肌酸等。對于常見氮代謝物或以上氮代謝物的同類物質,可結合標樣進行檢測,對于稀有的氮代謝物分子,如提供標準樣品,百泰派克可提供定制檢測。對于氮代謝過程所需要的關鍵酶,百泰派克可提供試劑盒測定服務。


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三、樣品制備

 

植物氮代謝物的提取方法(此部分涉及到公司的核心工藝,以下提供常規的提取工藝)

1)稱量約20 mg的樣品;

2)液氮研磨;

3)加入2 mL的甲醇超聲提取30 min;

4)離心,取1.5 mL濾液;

5)旋干,加入0.5 mL甲醇復溶;

6)0.45 μm的微孔濾膜過濾,用HPLC-MS檢測。

 

動物氮代謝物的提取方法(以尿液為例):

1)取新鮮的晨尿2 mL;

2)8000 rpm離心5 min;

3)取1.5 mL上清液;

4)用乙酸銨緩沖液稀釋10倍;

5)0.45 μm的微孔濾膜過濾,用HPLC檢測


 

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