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土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)活性檢測(cè)試劑盒

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土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)活性檢測(cè)試劑盒原理圖

一、土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)活性檢測(cè)試劑盒簡(jiǎn)介

土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)作為催化蔗糖降解的重要酶類(lèi),能夠在酸性條件下催化蔗糖分解為果糖 和葡萄糖,是土壤蔗糖代謝的關(guān)鍵酶之一,對(duì)增加土壤中可溶性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)起著重要作用,同時(shí)能夠表 征土壤生物學(xué)活性強(qiáng)度,也可作為評(píng)價(jià)土壤熟化程度和肥力水平的參照指標(biāo)。 土壤酸性轉(zhuǎn)化酶能夠催化蔗糖分解為葡萄糖和果糖,進(jìn)一步與 3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅 色氨基化合物,產(chǎn)物在 540 nm 處具有特征吸收峰,通過(guò)吸光值變化即可表征土壤酸性轉(zhuǎn)化酶的活性。


二、土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容

土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)活性檢測(cè)試劑盒內(nèi)容圖



三、土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明

測(cè)定過(guò)程中所需要的儀器和試劑:可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離 心機(jī)、烘箱、30-50 目篩、恒溫水浴/培養(yǎng)箱、甲苯和蒸餾水。

1.土壤樣本的預(yù)處理 新鮮土樣自然風(fēng)干或 37℃烘箱風(fēng)干,過(guò) 30-50 目篩。


2.測(cè)定步驟 ①分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 540 nm,蒸餾水調(diào)零。 ②在離心管中依次加入下列試劑(可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整樣本量): 試劑 測(cè)定管 (μL) 對(duì)照管 (μL) 標(biāo)準(zhǔn)管 (μL) 空白管 (μL) 風(fēng)干土樣(mg) 100 100 - - 標(biāo)準(zhǔn)稀釋液 - - 800 - 試劑一 - 800 - 800 試劑二 800 - - - 甲苯 20 20 20 20 37℃反應(yīng) 60 min,立即 95℃處理 10 min(密封以防止水分散失) 冰浴迅速冷卻至室溫,10000 rpm 常溫離心 10 min,取上清 上清液 700 700 700 700 試劑三 300 300 300 300 充分混勻,95℃顯色 10 min(密封以防止水分散失) 冰浴迅速冷卻至室溫。


3.吸光值測(cè)定:測(cè)定 540 nm 處吸光值,記為 A 測(cè)定、A 對(duì)照、A 標(biāo)準(zhǔn)和 A 空白;計(jì)算?A 測(cè)定=A 測(cè)定-A 對(duì)照,?A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。注:空白管只需測(cè)定 1-2 次,每個(gè)測(cè)定管均需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立:以 0.24、0.20、0.16、0.12、0.08、0.04 mg/mL 為橫坐標(biāo)(x),以其對(duì)應(yīng)的 ΔA 標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)(y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),得到線(xiàn)性回歸方程 y=kx+b,將 ΔA 測(cè)定帶入公式得到 x(mg/mL)。


4.土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)活性計(jì)算 單位定義:37℃條件下,每 g 土壤每天催化生成 1 mg 還原糖定義為一個(gè)酶活力單位。 S-AI(U/g)= x×V2 W×T = 19.2×x W 注釋?zhuān)篤2:反應(yīng)體系中加入試劑二的體積,0.8 mL;W:風(fēng)干土壤樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間: 60 min=1/24 d 。


土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)活性檢測(cè)試劑盒注意圖

四、土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(S-AI)活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品注意事項(xiàng) 

①若測(cè)定吸光值超出標(biāo)準(zhǔn)吸光值線(xiàn)性范圍:高于標(biāo)準(zhǔn)上限值建議將上清液使用蒸餾水稀釋或適當(dāng) 減少樣本量后再進(jìn)行測(cè)定;低于標(biāo)準(zhǔn)下限值建議適當(dāng)增加樣本量或適當(dāng)延長(zhǎng)酶促反應(yīng)時(shí)間后再進(jìn)行測(cè) 定,計(jì)算時(shí)相應(yīng)修改。

②為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失,測(cè)定前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)(以實(shí)際收到說(shuō)明書(shū)內(nèi)容為準(zhǔn)), 確認(rèn)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備是否充分,操作步驟是否清楚,且務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)測(cè)定。


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