生化試劑盒 - 酸性蛋白酶（ACP）活性檢測(cè)試劑盒說明書 Acidic Protease (ACP) Activity Assay Kit 一、酸性蛋白酶（ACP）活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品描述 酸性蛋白酶（ACP）是在酸性環(huán)境下作用于蛋白質(zhì)肽鍵的一類蛋白酶，可將蛋白質(zhì)水解為氨基酸、
多肽以及游離氨基酸。酸性蛋白酶能在低 pH 條件下能夠有效水解蛋白質(zhì)，在酒精發(fā)酵、食品加工、
釀造、飼料添加、皮革加工等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。
酸性蛋白酶能夠在酸性條件下，催化酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸，酪氨酸在堿性條件下能夠還原磷鉬
酸化合物生成鎢藍(lán)，產(chǎn)物在 680 nm 處具有特征吸收峰，通過吸光值變化即可表征酸性蛋白酶的活性。
二、酸性蛋白酶（ACP）活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容圖示 
三、酸性蛋白酶（ACP）活性檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品使用說明 測(cè)定過程中所需要的儀器和試劑：可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽/勻漿
器、可調(diào)式移液器、臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴/培養(yǎng)箱和蒸餾水。 粗酶液的制備（可根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整樣本量及比例） ①細(xì)菌或細(xì)胞：離心收集細(xì)菌或細(xì)胞至離心管內(nèi)，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）
為（500-1000）：1 的比例（建議 500 萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴超聲破碎（功
率 300 W，超聲 3 s，間隔 7 s，總時(shí)間 3 min），4℃ 8000 g 離心 10 min，取上清置于冰上待測(cè)。 ②組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為 1：（5-10）的比例（建議稱取 0.1 g 組織，加
入 1 mL 提取液）處理樣品，冰浴勻漿，4℃ 8000 g 離心 10 min，取上清置于冰上待測(cè)。
③血清、培養(yǎng)液等液體樣本：直接測(cè)定或使用提取液適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。 測(cè)定步驟 ①分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 680 nm，蒸餾水調(diào)零。 ②使用前將試劑一、試劑二和試劑三 30℃預(yù)熱 30 min。 ③在離心管中依次加入下列試劑： 
吸光值測(cè)定：取 200 μL 反應(yīng)液于微量玻璃比色皿/96 孔板中，測(cè)定 680 nm 處吸光值，記為 A 測(cè)
定、A 對(duì)照、A 標(biāo)準(zhǔn)和 A 空白；計(jì)算?A 測(cè)定=A 測(cè)定-A 對(duì)照，?A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)-A 空白。注：標(biāo)準(zhǔn)管
和空白管只需測(cè)定 1-2 次，每個(gè)測(cè)定管均需設(shè)立一個(gè)對(duì)照管。 .酸性蛋白酶（ACP）活性計(jì)算
注釋：C 標(biāo)準(zhǔn)：酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液濃度，0.25 μmol/mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入粗酶液的體積，
0.02 mL；V 提：粗酶液總體積，1 mL；V 酶促：酶促反應(yīng)總體積，0.1 mL；Cpr：粗酶液蛋白濃度，
mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。
四、酸性蛋白酶（ACP）活性檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng) ①若?A 測(cè)定差值較小，可適當(dāng)延長(zhǎng)第一步反應(yīng)時(shí)間（15-25 min），計(jì)算時(shí)相應(yīng)修改； ②為保證結(jié)果準(zhǔn)確且避免試劑損失，測(cè)定前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書（以實(shí)際收到說明書內(nèi)容為準(zhǔn)），
確認(rèn)試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備是否充分，操作步驟是否清楚，且務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本進(jìn)行預(yù)測(cè)定，
過程中問題請(qǐng)您及時(shí)與工作人員聯(lián)系。
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